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        核酸提取解決方案的操作與運用技巧

        更新時間??2022-03 閱讀 86

        對于大多數生物研究人員來說,細胞培養、細菌培養、提取核酸等。都是實驗室,實驗操作費時費力,過程中可能會遇到各種坑。今天我們要講的是如何讓你的核酸 extraction不再煩惱!


        博科核酸提取儀


        核酸分為脫氧核糖核酸( DNA)和核糖核酸( RNA)。它是由許多核苷酸單體聚合而成的生物大分子化合物,是生命最基本的物質之一。分別提取核酸 is DNA extraction和RNA extraction。兩種方法的提取原理大致相同。簡單來說就是分兩步:細胞或組織裂解和核酸 純化。

        核酸 extraction 純化常用的方法有酚/氯(lü)仿萃取法、離心柱法、磁珠法等。


        1、酚/氯(lü)仿萃取法

        B (xi)烯丙基氯(lü) DNA的仿提取是用苯酚作為蛋白質變性劑,反復提取,使蛋白質變性,用SDS(十二烷基磺酸鈉)裂解細胞膜,在蛋白酶K和EDTA存在下消化蛋白質或多肽或小肽分子,使核蛋白變性降解,使DNA不含核蛋白。


        苯酚/氯(lü)模擬萃取法的優點是成本低,對實驗條件要求低。這種方法的缺點也很明顯:由于使用了苯(芬)酚、氯(呂)仿等有機試劑,毒性較高,長期操作對人員健康影響較大;而且核酸的回收率低,損耗大。


        離心柱純化

        以DNA萃取離心柱為例。離心柱結構主要是一種特殊的硅基質吸附材料,可以特異性吸附DNA,而RNA和蛋白質會通過。該方法可選擇性吸附核酸,而不吸附蛋白質和鹽,從而實現核酸與蛋白質和鹽的分離,是目前試劑盒提取廣泛采用的方法。


        該方法受人為操作因素影響較小,提取的DNA純度穩定性很高。此外,離心柱法提取的DNA純度高于傳統酚氯(lü)模擬法提取的DNA純度。離心柱法以其低廉的價格和相對方便的操作,逐漸取代了傳統的DNA萃取法,被高校、科研院所等市場普遍接受。


        這種方法的缺點是需要的樣本較多,但不適合稀有樣本。當樣品過量時,需要反復離心,樣品提取效率低,不便于高通量和自動化操作。這與現代生物實驗,特別是基因診斷、疾病檢測和轉基因檢測領域的高通量和自動化的要求不相適應。離心柱法DNA萃取需要大量的操作人員和儀器。當面對突發疫情時,更需要有高通量DNA提取設備和方法,更有效、更準確地監測和控制疫情。


        磁珠法

        磁珠法是一種分離純化固體載體(SPRI)的可逆固定化方法。主要原理是:在不同濃度的PEG(聚乙二醇;;聚乙二醇)、不同片段大小的DNA會吸附在磁珠的羧基修飾層上,這些DNA可再次溶于水洗脫回收。


        實驗中使用的磁珠分為五層,從里到外依次為:核為聚苯(xi)烯材料、超順磁材料(主要是四氧化三鐵)、第二層聚苯(xi)烯材料、第二層超順磁材料和表面粗糙的羧基修飾層。粗糙的表面更有利于核酸與羧基改性層的結合。該方法是將純化介質包覆在納米級磁珠表面,DNA被介質吸附,DNA附著在磁珠上,在外磁場的作用下定向移動,使核酸與其他物質分離。


        與其他集中式方法相比,磁珠法具有無可比擬的優勢,包括:

        (1)提取靈敏度高,只需少量樣品即可提取核酸;

        (2 )/ kloc-6/純度高,磁珠與核酸的特定組合能使核酸與雜質充分分離,使得提取的核酸純度高、濃度高;

        (3)可以實現自動化和批量操作,通過機器自動化完成操作,人力較少,同時可以完成多個樣品的批量操作。以32孔核酸自動提取器為例,一個樣本的提取時間最多可用于處理32個樣本,滿足了生物學高通量運行的要求,能夠在傳染病爆發時快速及時地做出反應。

        (4)操作簡單,時間短。整個提取過程只有四步。根據儀器不同,部分儀器提取時間可縮短至30分鐘,大大提高了實驗效率。

        (5)安全無毒,不使用傳統方法中的苯、氯(lü)仿等有毒試劑,*大限度減少對實驗操作人員的傷害,完全符合現代環保理念;




        近年來,磁珠法已經成為核酸提取的必備工具之一,成為核酸自動提取設備的必備部件之一。Automatic 核酸 extractor對于經常用大量實驗樣本做實驗的實驗人員來說是個不錯的選擇。而且對于各種核酸,無論是質粒DNA,基因組DNA,還是RNA,一個自動化的核酸提取器就可以滿足實驗者的提取要求。


        目前全自動核酸提取器基本可以滿足核酸的大批量提取的需要,針對不同的樣本(如全血、質粒、培養細胞、組織等。)和核酸 types(基因組DNARNA/)